跌打損傷凝膠膏是我院臨床醫生根據相關的中醫藥文獻資料并結合自己的臨床經驗研制而成的具有治療跌打損傷作用的臨床經驗方。處方由三七、白芷、木香、乳香、沒藥、麻黃和冰片七味中藥組成,具有活血散瘀,消腫止痛的功效,臨床療效確切。跌打損傷驗方多以養血活血化瘀為主,乳香、沒藥出現頻次較高,二藥入血分,散瘀止痛力強。從統計的結果看,溫熱藥出現的頻次多于寒涼藥[a、b]。本文采用高效液相色譜法對麻黃中的有效成分鹽酸麻黃堿進行含量測定,采用氣相色譜法對冰片中的揮發性成分龍腦進行含量測定,旨在為該方的進一步研發奠定基礎。
1 儀器和試藥
HP 1100高效液相色譜儀;HP 6890N 氣相色譜儀;鹽酸麻黃堿對照品(批號171242-200805)、龍腦對照品(批號110881—200906)、水楊酸甲酯對照品(批號110707—200910)均購于中國藥品生物制品檢定所;甲醇、四氫呋喃(色譜純,天津市康科德科技有限公司),磷酸(分析純,天津市化學試劑三廠),乙腈(色譜純,美國Fisher公司),95%乙醇、鹽酸(分析純,天津市康科德科技有限公司),甲酸(分析純,天津市化學試劑三廠),雙蒸水(實驗室自制),跌打損傷凝膠膏(自制)。
2 方法和結果
2.1 鹽酸麻黃堿
2.1.1 色譜條件[1-3]
Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相為甲醇(A)-0.02 mol?l-1磷酸二氫鉀與0.4%三乙胺水溶液(B),用10% H3PO4調pH值至2.5-3.0;A:B=8:92,等度洗脫;檢測波長:207 nm;柱溫:30 ℃;流速1 ml?min-1。理論塔板數按鹽酸麻黃堿計算不低于8000。
2.1.2 溶液配制
對照品溶液的制備:精密稱取鹽酸麻黃堿對照品12.65 mg,置100 mL容量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,即得對照品貯備液;再精密量取1 mL置25 mL容量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻,即得對照品溶液,置冰箱冷藏保存備用。
供試品溶解的制備:取跌打損傷凝膠膏1片,用剪刀剪碎,除去蓋襯,置于錐形瓶中,精密吸取氨水2 ml并量取氯仿98 ml加于錐形瓶中,稱定重量,超聲處理20 分鐘,室溫放置至冷,再稱定重量,用氯仿補足減失的重量,搖勻,濾過,續濾液備用,量取50 ml續濾液,減壓濃縮蒸干,加流動相超聲溶解置于25 ml量瓶中并稀釋至刻度,濾過,取續濾液為供試品溶液。
輔料對照溶液:取空白輔料一片,同法操作,制得輔料對照溶液。
陰性對照溶液:根據跌打損傷凝膠膏的處方制備不含麻黃的陰性樣品,照供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。
2.1.3 方法學考察
2.1.3.1 專屬性考察
精密吸取2.1.2項下的對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液、輔料對照溶液各20 µL注入液相色譜儀,在上述色譜條件下得到相應色譜圖。結果處方中其他成分和輔料對結果沒有影響,方法專屬性良好。見圖1。
圖1 鹽酸麻黃堿專屬性試驗
1. 鹽酸麻黃堿 a.陰性對照溶液 b. 輔料對照溶液 c.對照品溶液 d. 供試品品溶液
2.1.3.2 線性范圍的考察
精密吸取對照品貯備液(濃度0.1265 mg.ml-1)0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL移入25 mL量瓶中,加流動性稀釋至刻度,搖勻,即得到6種不同濃度的對照品溶液。按上述測定方法,各20 µL注入液相色譜儀,記錄色譜圖。以對照品鹽酸麻黃堿(ng)的進樣量為橫坐標,以鹽酸麻黃堿峰面積為縱坐標,繪制標準曲線。其回歸方程為方Y=2.3227X-5.6256,相關系數r=0.9999,結果表明鹽酸麻黃堿在50.6~506ng范圍內線性關系良好。
2.1.3.3 精密度試驗
精密吸取鹽酸麻黃堿對照品溶液(濃度0.01012mg.ml-1)20µL注入液相色譜儀,重復進樣6次,測定鹽酸麻黃堿峰面積,結果RSD為0.84%(n=6),表明方法精密度良好。
2.1.3.4 重復性試驗
取同一批樣品6份,按2.1.2溶液配制項下供試品溶液的制備方法制備,進樣量為20 µL,按上述色譜條件測定樣品中鹽酸麻黃堿的含量,結果每片平均含量為6.85 µg?cm-2,RSD為1.52%(n=6),表明本法重復性良好。